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NTA檢測(cè)-武漢科銳諾

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iTRAQ (isobarictags for relative and absolute quantitation，同位素標(biāo)記相對(duì)和絕1對(duì)定量)是由AB SCIEX公司研發(fā)的一種體外同重同位素標(biāo)記的相對(duì)與絕1對(duì)定量技術(shù)。該技術(shù)使用8種（或4種）不同的同位素試劑來同時(shí)標(biāo)記和比較8種（或4種）不同的蛋白質(zhì)樣品。這些試劑由3個(gè)不同的化學(xué)標(biāo)簽組成：報(bào)告部分，肽反應(yīng)部分和平衡部分。報(bào)告部分為客戶可按需選擇標(biāo)記個(gè)數(shù)，肽反應(yīng)基團(tuán)將iTRAQ標(biāo)簽與肽段的N-端基團(tuán)和每個(gè)賴氨酸側(cè)鏈相連，NTA檢測(cè)，可標(biāo)記所有酶解肽段，平衡部位可保證iTRAQ試劑標(biāo)記的不同樣本的同一肽段具有相同的質(zhì)荷比，因此改變?nèi)我籭TRAQ試劑，不同同位素在標(biāo)記同一多肽后在一級(jí)質(zhì)譜檢測(cè)，分子量都完全相同。而在串聯(lián)質(zhì)譜中，同重元素標(biāo)記肽段平衡基團(tuán)在二級(jí)質(zhì)譜發(fā)生中性丟失。信號(hào)離子表現(xiàn)為不同質(zhì)荷比的峰，因此，根據(jù)波峰的高度及面積，可以得到蛋白質(zhì)的定量信息。

外泌體研究開展的如火如荼。不論是 SCI 文章的發(fā)表還是各類基1金的申請(qǐng)，外泌體相關(guān)研究表現(xiàn)都非常亮眼。外泌體提取后，研究人員面臨的一個(gè)重要問題就是，我提取的是不是外泌體？如果是的話，質(zhì)量如何？

現(xiàn)階段，對(duì)外泌體進(jìn)行鑒定主要有三種主流的方法：電鏡、粒徑和 Western blot 分析靶標(biāo)物。之前我們已經(jīng)對(duì)外泌體電鏡進(jìn)行了總結(jié)，今天我們來看看外泌體的粒徑分析。

外泌體粒徑分析原理

外泌體粒徑分析方法為納米顆粒跟蹤分析（Nanoparticle tracking Analysis， NT A)，其原理是對(duì)每個(gè)顆粒的布朗運(yùn)動(dòng)進(jìn)行追1蹤和分析，結(jié)合 Stockes-Einstein 方程式計(jì)算出納米顆粒的流體力學(xué)直徑和濃度。NT A技術(shù)已被外泌體研究領(lǐng)域認(rèn)可為外泌體表征手段之一。相較于其他表征方式，NT A技術(shù)的樣本處理更簡(jiǎn)單、更能保證外泌體原始狀態(tài)、檢測(cè)速度更快。

外泌體不僅含有蛋白質(zhì)抗原，還含有分泌細(xì)胞來源的mRNA或non-coding RNA（特別是miRNA），其功能引起廣泛關(guān)注。外泌體的脂質(zhì)雙分子層膜可保護(hù)這些RNA，不被RNase分解，在血液、體液中穩(wěn)定存在。在外泌體及其分泌細(xì)胞中均可檢測(cè)出RNA，也存在僅能在其中之一檢測(cè)出RNA的情況，因此我們?cè)O(shè)想存在一種可以選擇性將特定的RNA吸收至外泌體的機(jī)制。

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