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武漢貝科新肽科技有限公司
主營：原位雜交,亞細胞定位,蛋白互作,啟動子篩選
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原位雜交技術(shù)的定義和基本原理原位雜交技術(shù)是一種基于核酸分子雜交原理，將標記的核酸探針與生物組織或細胞中的DNA或RNA進行特異性結(jié)合，從而在細胞水平上檢測目標核酸序列分布的技術(shù)。原位雜交技術(shù)的基本原理是利用DNA或RNA的互補性，通過加熱或化學反應使探針與組織或細胞中的目標核酸序列形成雙鏈復合物，進而實現(xiàn)目標核酸序列的定位。
菌落的裂解及DNA結(jié)合于纖維素濾膜
（1） 在一張保鮮膜上制作一個裝有0.5mol/L NaOH的小洼（0.75ml），使菌落面朝上，將濾膜放到小洼上，GISH，展平保鮮膜，使濾膜均勻濕潤，讓濾膜留于原處2-3分鐘。
（2） 用干紙巾從濾膜的下方吸干濾膜，用一張新的保鮮膜和新配制的0.5mol/L NaOH重復步驟（1）。
（3） 吸干濾膜，植物染色體原位雜交，將濾膜轉(zhuǎn)移到新的帶有1mol/L Tris·Cl(pH7.4）的保鮮膜洼上。5分鐘后吸干濾膜，再重復一次該步驟。
（4） 吸干濾膜，把它轉(zhuǎn)移到有1.5mol/L NaCl、0.5mol/L Tris·Cl (pH7.4）的保鮮膜小洼上5分鐘后吸干濾膜，湖北原位雜交，轉(zhuǎn)移到一張干的濾紙上，置于室溫20-30分鐘，使濾膜干燥。
（5） 將濾膜夾在兩張干的濾紙之間，在真空烤箱中于80℃干烤2小時，固定DNA。
（6） 將固定在膜上的DNA與32 P標記的RNA進行雜交。
預雜交
1）每個管中置換成大約300ulHYB－溶液，動物組織原位雜交，60℃水浴5分鐘，避免振蕩。
2）用等體積的HYB＋取代HYB－。
3）60℃水浴，預雜交4小時以上。
雜交
1）吸去預雜交的HYB＋，加上100ul已加入探針的HYB＋溶液（探針濃度約為1ng/ul）..
2）60℃ 溫浴過夜。
注：雜交與預雜交的溫度可以是55到60度不等，溫度越低，探針結(jié)合越好，溫度越高，背景越小。
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第2年
