核酸原位雜交可根據(jù)其檢測物而分為細(xì)胞內(nèi)原位雜交和組織切片內(nèi)原位雜交;根據(jù)其所用探針及所要檢測核酸的不同又可分為DNA-DNA, RNA-DNA, RNA-RNA雜交。但不論哪種雜交都必須經(jīng)過組織細(xì)胞的固定,預(yù)雜交,雜交,沖等一系列洗步驟及自顯影或酶法顯色以顯示雜交結(jié)果。
我們在這兒介紹的是整胚原位雜交,植物組織原位雜交,不同于一般的在載片上對細(xì)胞和組織切片進(jìn)行探針雜交及檢測的原位雜交,
熒光原位雜交(Fluorescence In Situ Hybridization,F(xiàn)ISH)是在性原位雜交技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種非性分子生物學(xué)和細(xì)胞遺傳學(xué)結(jié)合的新技術(shù),是以熒光標(biāo)記取代同位素標(biāo)記而形成的一種新的原位雜交方法。
FISH技術(shù)具有許多優(yōu)點,如非性、高特異性、高靈敏度、快速簡便、可多重染色等。這些特點使得FISH技術(shù)在細(xì)胞生物學(xué)和臨床醫(yī)學(xué)領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用,例如用于研究基因表達(dá)、基因組變異和染色體異常等。
原位雜交雜交液
(一)雜交液內(nèi)除含一定濃度的標(biāo)記探針外,還含有較高濃度的鹽類、甲酰胺、硫酸葡聚糖、牛白蛋白及載體DNA或RNA等。
(二)雜交液中含有較高濃度的Na+可使雜交率增加,可以減低探針與組織標(biāo)本之間的靜電結(jié)合。
(三)賈酰胺可使雜交溫度降低,所以雜交液中加入適量的甲酰胺,可避免因雜交溫度過高而引起的組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的破壞以及標(biāo)本的脫落。
(四)硫酸葡聚糖能與水結(jié)合,從而減少雜交液的有效容積,提高探針有效濃度,以達(dá)到提高雜交率的目的。
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